多西环素（Doxycycline）的EP全套杂质有哪些？

欧洲药典EP 11.0收载了多西环素的两种形式：多西环素盐酸盐半乙醇半水合物（Doxycycline Hyclate）和多西环素一水合物（Doxycycline Monohydrate），两个专论的杂质谱完全一致，共收录6个杂质，其中指定控制杂质（Specified impurities）4个，其他可检出杂质（Other detectable impurities）2个，有关物质采用反相高效液相色谱（HPLC）法检测，乙醇残留采用气相色谱（GC）法检测。

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杂质A

• 官方名称：Doxycycline Hyclate EP Impurity A
• 化学名：(4S,4aR,5S,5aR,6S,12aS)-4-(dimethylamino)-3,5,10,12,12a- pentahydroxy-6-methyl-1,11-dioxo-1,4,4a,5,5a,6,11,12a- octahydrotetracene-2-carboxamide
• CAS：3219-99-6
• SMILES：[H][C@]1(O)[C@@]2([H])C(=C(O)[C@]3(O)C(=O)C(C(N)=O)=C(O)C@@(N(C)C)[C@@]31[H])C(=O)C1=C(O)C=CC=C1[C@@]2([H])C
• EP官方CRS：有
• CATO货号：C4X-193115

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杂质B

• 官方名称：Doxycycline Hyclate EP Impurity B
• 化学名：(4S,4aR,5S,5aR,12aS)-4-(dimethylamino)-3,5,10,12,12a-pentahydroxy-6-methylene-1,11-dioxo- 1,4,4a,5,5a,6,11,12a-octahydrotetracene-2-carboxamide
• CAS：914-00-1
• SMILES：[H][C@@]12C(=C)C3=CC=CC(O)=C3C(=O)C1=C(O)[C@]1(O)C(=O)C(C(N)=O)=C(O)C@@(N(C)C)[C@]1([H])[C@@]2([H])O
• EP官方CRS：有
• CATO货号：CCAD302071

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杂质C

• 官方名称：Doxycycline Hyclate EP Impurity C
• 化学名：(4R,4aR,5S,5aR,6R,12aS)-4-(dimethylamino)-3,5,10,12,12a-pentahydroxy-6-methyl-1,11-dioxo- 1,4,4a,5,5a,6,11,12a-octahydrotetracene-2-carboxamide
• CAS：6543-77-7
• SMILES：[H][C@]1(O)[C@@]2([H])C(=C(O)[C@]3(O)C(=O)C(C(N)=O)=C(O)C@(N(C)C)[C@@]31[H])C(=O)C1=C(O)C=CC=C1[C@]2([H])C
• EP官方CRS：有
• CATO货号：C4X-19313

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杂质D

• 官方名称：Doxycycline Hyclate EP Impurity D
• 化学名：(4R,4aR,5S,5aR,6S,12aS)-4-(dimethylamino)-3,5,10,12,12a-pentahydroxy-6-methyl-1,11-dioxo- 1,4,4a,5,5a,6,11,12a-octahydrotetracene-2-carboxamide
• CAS：97583-08-9
• SMILES：[H][C@]1(O)[C@@]2([H])C(=C(O)[C@]3(O)C(=O)C(C(N)=O)=C(O)C@(N(C)C)[C@@]31[H])C(=O)C1=C(O)C=CC=C1[C@@]2([H])C
• EP官方CRS：无
• CATO货号：C4X-19314

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杂质E

• 官方名称：Doxycycline Hyclate EP Impurity E
• 化学名：(4S,4aR,5S,5aR,6S,12aS)-4-(dimethylamino)-3,5,6,10,12,12a-hexahydroxy-6-methyl-1,11-dioxo- 1,4,4a,5,5a,6,11,12a-octahydrotetracene-2-carboxamide
• CAS：2058-46-0
• SMILES：[H][C@]1(O)[C@@]2([H])C(=C(O)[C@]3(O)C(=O)C(C(N)=O)=C(O)C@@(N(C)C)[C@@]31[H])C(=O)C1=C(O)C=CC=C1[C@@]2(C)O
• EP官方CRS：无
• CATO货号：CTTC210108

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杂质F

• 官方名称：Doxycycline Hyclate EP Impurity F
• 化学名：(4S,4aR,5S,5aR,6R,12aS)-2-acetyl-4-(dimethylamino)-3,5,10,12,12a-pentahydroxy-6-methyl-4a,5a,6,12a- tetrahydrotetracene-1,11(4H,5H)-dione
• CAS：—
• SMILES：[H][C@]1(O)[C@@]2([H])C(=C(O)[C@]3(O)C(=O)C(C(C)=O)=C(O)C@@(N(C)C)[C@@]31[H])C(=O)C1=C(O)C=CC=C1[C@]2([H])C
• EP官方CRS：有
• CATO货号：C4X-19319

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数据来源： 欧洲药典（EP 11.0）Doxycycline专论原文 Disregard limit： 0.05 per cent Total impurities limit： maximum 3.0 per cent

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多西环素的EP指定杂质多为手性差向异构体和结构类似物，杂质A、C、D均为不同手性位点的差向异构体，结构相似度极高，对色谱分离度要求严苛。其中杂质F（2-乙酰-2-脱氨甲酰多西环素）相对保留时间仅为主峰的1.3倍，紧邻主峰出峰，是分离难点，国内研究也证实该杂质是多西环素质量控制中需要重点关注的紧邻主峰杂质。EP方法采用端基封键的极性嵌入C18聚合物色谱柱，通过添加四丁基硫酸氢铵作为离子对试剂改善保留和分离，要求杂质A与B、B与主峰的分离度均不低于2.0，对系统适用性要求较高。现有反相离子对体系即可满足差向异构体的分离，无需额外使用手性色谱柱，但不同品牌色谱柱的键合相选择性差异可能导致分离度不达标，建议方法学验证时筛选至少2-3种不同品牌的同类型色谱柱，对于低限度杂质C可采用LC-MS/MS提高检测灵敏度（推断）。

从NMPA审评视角来看，多西环素是国内仿制药一致性评价的重点品种，根据ICH Q3A原料药杂质控制要求，对于EP明确的指定杂质，注册申报时必须满足EP规定的限度要求。其中杂质A（6-epidoxycycline）是工艺过程中最易产生的差向异构化杂质，限度为2.0%，审评时会重点核查工艺对该杂质的去除能力，以及批次间杂质谱的一致性。NMPA要求仿制原料药的杂质谱必须与原研对比，所有超过报告阈值的杂质都需要定位，EP指定的4个杂质已有明确的官方CRS，企业需采用法定对照品完成定位；对于D、E两个其他可检出杂质，仅当实际检出超过0.1%限度时才需要进行结构确证，这与EP和ICH的要求一致。EMA在该问题上的口径与NMPA基本一致，仅对注射级多西环素额外要求控制细菌内毒素，需要关注生产过程中的内毒素去除验证。

有EP官方CRS的杂质，可通过EDQM获取，是方法学验证的首选。EP未提供官方CRS的D、E杂质，需要企业自行解决来源，杂质的纯度和溯源性直接影响方法学验证的有效性。对于其他可检出杂质，按照EP和ICH Q3A要求无需强制鉴定，但若实际检出超过限度则需要按要求评估是否需要结构确证。如需获取Doxycycline EP全套杂质对照品（包括EP未提供官方CRS的杂质），欢迎联系CATO Research Chemicals（佳途科技）获取支持。

CATO Research Chemicals（佳途科技）提供多西环素（Doxycycline）EP全套杂质对照品，所有产品均通过ISO 17034双认证（CNAS + ANAB），每批次附带完整COA及溯源证书，完全支持EMA/NMPA/ICH等不同场景的注册申报需求。